详细介绍:
培养ATCC细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长细胞如COS-7、CHO等用消化法传代;部分贴壁生长的细胞如PC12用直接吹打即可传代。
一、用品
(1) 0.25%胰蛋白酶,全培养液
(2) 滴管,离心管,培养瓶(皿),培养瓶盖,注射器,计数6
二、ATCC细胞步骤
(1) 贴壁ATCC细胞消化法传代:
① 吸除瓶内旧培养液。
② 以50ml培养瓶为例,向瓶内加入2-3ml胰蛋白酶,轻轻摇动培养瓶,使消化液流遍所有细胞表面。
③ 消化最好在37C或室温25C以上环境下进行。消化后把培养瓶放置显微镜下进行观察.发现胞质回缩、细胞间隙增大后。应立即终止消比,然后吸掉消化液后再加全培养液终止消化。
④ 用弯头吸管,吸取瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞,吹打过程要顺序进行,从培养瓶底的一端开始到另一端结束,以保证所有的底部都被吹到。吹打动作要轻柔同时尽可能不要出现泡沫。这些都对细胞有损伤。细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液。
⑤ ATCC细胞计数,分别接种在新的培养瓶内。
部分贴壁生长细胞,不经消化处理直接吹打也可使细胞从瓶壁脱落下来,而进行传代。但这种方法仅限于部分贴壁不牢的细胞,如Hela、PC12细胞等。直接吹打对细胞损伤较大,细胞常也有较大数目的丢失,因而绝大部分贴壁生长的细胞均需消化后,才能吹打传代。
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