详细介绍:
当高速冷冻离心机的离心刚开始时如果见到有快速沉降的峰,几分钟内就到达分析池底部,一般多是由于样品发生部分聚合形成快速沉降的高聚物,如蛋白质样品液遇到某些变性因素时会部分变性而沉淀。高速冷冻离心机离心达速后样品的的记心图象显示一个对称的峰形,一般可以认为样品是离心均一的。但是对样品的真正均一性还应用其他方法进一步检测,如电泳,层析等。某些混合样品偶然亦会给出一个对称峰的。峰形通常会随时间而扩展,这是由于样品扩散的结果。但如果峰形扩展很快,则该样品可能是多分散性的。如果高速冷冻离心机离心图象中表现几个峰,说明样品中有几个组分,每一个峰代表相应组分的沉降界面,因此可以测定每一个组分的沉降系数值。根据峰的面积可以测量组分的浓度值。
有时高速冷冻离心机离心的图象表现出一个不对称的峰,这可能是由于下列几种情况所致。
①几个沉降系数接近的组分峰形重叠,
②样品是多分散性的,其分子量分布不均匀
③某些相互作用强的高分子,其沉降速度对浓度依赖很大,如DNA,多糖分子,若测定于高浓度,在界面区由于浓度变化造成沉降速度不一致而致峰形呈不对称分布。这类样品在更大浓度时甚至会形成一非常尖锐的界面,在离心沉降图中表现成一根垂直线,看不到任何峰形。根据这种图形测定沉降系数误差将很大。通常这类样品应该测定于很稀的浓度,此条件下分子相互作用变小,界面扩展的峰形,才可以测到正确的沉降系数。
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